La hija del profesor Layton, Katrielle Layton, junto con su perro hablante Sheri y su asistente Ernest Greeves, se hacen cargo de la agencia de detectives. Diariamente, ellos resuelven situaciones extrañas que ocurren en Londres.

Al principio, ella comenzó a trabajar en la agencia como ayudante de su padre, Hershel Layton, quien un día desapareció. Gracias a su forma de pensar y sus habilidades para resolver misterios ella gradualmente se hizo famosa y ahora cada vez más obtiene más clientes para su agencia.

Katrielle Layton

Seiyuu: Kana Hanazawa

Katrielle es una chica joven a la que le encantan los acertijos y los sucesos extraños. Ella es alegre y amistosa, también tiene una manera especial de agradecerle a su padre por sus esfuerzos, el profesor Layton, quien le enseñó cómo comportarse como damita actuando con gracia y dignidad. A primera vista ella parece ser exigente. Su debilidad son los dulces elegantes.

Sheri

Seiyuu: Juurouta Kosugi

Sheri es el asistente de Katrielle, es un perro que puede hablar. Las demás personas solo lo pueden escuchar ladrando cuando él habla, pero Katrielle y Ernest lo pueden entender hablando normalmente. Él dice que recibió su nombre de un detective muy famoso.

Earnest Greeves

Seiyuu: Yasuhiro Ikeda

Ernest es el otro asistente de Katrielle. Él tiene un aspecto aburrido, pero este joven posee un corazón gentil. Katrielle lo llama Ernie y siempre lo trata como un trabajador de medio tiempo y no como su asistente, pero él respeta mucho a Katrielle.

Inspector Ercule Hastings

Seiyuu: Youhei Tadano

Ercule es un inspector del Scotland Yard. Sus convicciones para proteger la paz en Londres es muy fuerte y aunque luce aterrador, el público tiene mucha fé en él. Él algunas veces contrata los servicios de Katrielle para ayudarlo en casos especialmente difíciles.

Emiliana Perfetti

Seiyuu: TBA

Emiliana se ha ganado la reputación de ser una analista genio en Londres. Ella ve a Katrielle como su rival, y cada vez que tiene la oportunidad pelea con ella.